Skip to content

woda rozana dzialanie

2 miesiące ago

604 words

Każdy DNA shTAG subklonowany do pRSET transformowano do E. coli w celu ekspresji bakteryjnego produktu białkowego. shMOG / E, silnie eksprymowany z pRSET / shTAG / MOG, oczyszczono za pomocą chromatografii z chelatem metalu, jak opisano w Metodach. Ponieważ shMBP / E i shPLP / E nie mogły być wyrażane z ich odpowiednich pRSET / shTAG, shPLP215 i rhMBP, które również zawierają epitopy kodowane przez odpowiednio shTAG / PLP i shTAG / MBP, generowano zgodnie z opisem w Methods. Rysunek Generacja kodu shMultiTAG / E dla hmTAP. (a) Schemat budowy shMultiTAG / E. (b) Sekwencja DNA ShMultiTAG / E i wyprowadzona sekwencja aminokwasowa hmTAP. ShMultiTAG / E wytworzono jak opisano w Methods przez ligację DNA shTAG / MOG, DNA shTAG / MBP i DNA shTAG / PLP. DNA shMultiTAG / E sklonowany w pRSET zsekwencjonowano (Figura 1b) i transformowano do E. coli. Analizy SDS-PAGE ekspresji bakteryjnej i oczyszczania shMOG / E, shPLP215 i hmTAP pokazano na Fig. 2a. Figura 2Bakteryjna ekspresja i oczyszczanie shMOG / E, shPLP215 i hmTAP i ich rozpoznawanie przez specyficzne dla epitopu komórki T. (a) Analizy SDS-PAGE wybarwione błękitem Coomassie: linia 1, przed indukcją IPTG; ścieżka 2, po indukcji IPTG (15 ul, co odpowiada 150 ul hodowli bakteryjnej); i ścieżka 3, oczyszczone rekombinowane białko (5. 10. g). (b) odpowiedź proliferacyjna przez specyficzne komórki T linii SJL / J PLP139-151a (lewy panel) i C3H.SW komórki linii komórek MOG 35-55a (prawy panel) do PLP139-151 (2,5 .g / ml), shPLP215 (10 .g / ml) lub hmTAP (25 .g / ml) i do MOG35-55 (2,5 .g / ml), shMOG / E (10 .g / ml) lub hmTAP (25 .g / ml), odpowiednio. HmTAP jest odpowiednio przetwarzany i prezentowany encefalitogennym komórkom T specyficznym wobec epitopu. Wysoce specyficzne komórki T linii hodowane z PLP139-151 stymulowanych i myszy SJL / J i C3H.SW z primerem MOG35-55a testowano pod kątem ich odpowiedzi proliferacyjnej na hmTAP. Specyficzne dla PLP139-151 p i specyficzne dla MOG35-55 p linie komórek T reagowały tak silnie z hmTAP i odpowiednim antygenem, odpowiednio, shPLP215 lub shMOG / E, tak jak czyniono ich stymulującym syntetycznym peptydem (Figura 2b). HmTAP może być również odpowiednio przetwarzany in vivo, ponieważ reaktywne wobec hmTAP komórki T wywoływane po immunizacji hmTAP reagowały na shMOG / E, shPLP215 i rhMBP i peptydy reprezentujące odpowiednie epitopy tego rodzaju (patrz poniżej). Wyniki te wskazują, że epitopy w hmTAP są odpowiednio przetwarzane i że ich prezentacja w reaktywnych komórkach T nie zależy od ich wzajemnego połączenia tandemowego. HmTAP znosi rozwój EAE indukowanego przez PLP139-151. Ponieważ hmTAP może być odpowiednio rozpoznawany przez specyficzne dla epitopu komórki T in vitro, jego potencjalny wpływ na hamowanie takich specyficznych względem epitopu komórek T in vivo był najpierw oceniany po podaniu tolerogennym myszom SJL / J immunizowanym do indukcji EAE pojedynczym peptydem encefalitogennym PLP139. -151, który jest reprezentowany w hmTAP. Od dnia 5 lub 6 po prowokacji związanej z zapaleniem mózgu myszy otrzymywały na przemian dni cztery dootrzewnowe iniekcje hmTAP, PLP139-151 lub shMOG / E w PBS (Figura 3a). Jak można zobaczyć na Fig. 3a, shMOG / E nie wykazywał efektu tłumienia EAE wywołanego PLP139-151. Wysoce istotne zmniejszenie nasilenia choroby w początkowej fazie zaobserwowano u myszy leczonych peptydem PLP139-151 istotnym dla choroby; jednak takie leczenie nie zapobiegło późniejszemu ponownemu wystąpieniu choroby, prawdopodobnie związanemu z rozprzestrzenianiem się autoimmunizacji (Figura 3a). Przeciwnie, iniekcje dootrzewnowe hmTAP wywierały silne działanie hamujące na EAE indukowane przez PLP139-151, nie tylko w początkowej fazie, ale także w przewlekłym stadium choroby (Figura 3a). Figura 3 Omówienie indukowanego przez PLP139-151a EAE przez hmTAP jest związane z hamowaniem encefalitogennych komórek T
[przypisy: zapalenie przyzębia, zespół aspergera test, ziarnica złośliwa i chłoniaki nieziarnicze ]

0 thoughts on “woda rozana dzialanie”