Skip to content

szczawnica sanatoria opinie

2 miesiące ago

581 words

Frakcje zawierające wyizolowane białko, jak udowodniono za pomocą SDS-PAGE, połączono i poddano warunkom redukującym za pomocą a-merkaptoetanolu. Białko rozcieńczono do 50 a 100 ug / ml w 8 M moczniku i umożliwiono ponowne zwijanie przez dializę wobec stopniowo zmniejszających się stężeń mocznika (8. 0 M). Zagregowane białko usunięto przez odwirowanie. Nie obserwowano ekspresji shMBP / E i shPLP / E z pRSET / shTAG / MBP i pRSET / shTAG / PLP, odpowiednio. Konstrukcja shMultiTAG / E i ekspresja jego produktu białkowego, hmTAP. Aby skonstruować shMultiTAG / E, DNA shTAG / MBP i shTAG / PLP DNA wycięte odpowiednio z pGEMT / shTAG / MBP i pGEMT / shTAG / PLP poddano ligacji razem przez XhoI (fragment DNA shTAG / MBP-shTAG / PLP). DNA shTAG / MOG poddano amplifikacji PCR z pGEMT / shTAG / MOG przy użyciu oligonukleotydów shMOG Ib i VIb w celu usunięcia kodonu stop. Fragment DNA o oczekiwanej wielkości został zligowany z fragmentem DNA shTAG / MBP-shTAG / PLP przez Bglll. Powstały fragment DNA shTAG / MOG-shTAG / MBP-shTAG / PLP (shMultiTAG / E) klonowano następnie do pRSET, za pomocą NheI i EcoRI, 3. do jego tagu 6xHis. Analiza sekwencji DNA za pomocą swoistych dla pRSET starterów potwierdziła sekwencję shMultiTAG / E DNA kodującą shTAG / MOG, shTAG / MBP i shTAG / PLP sekwencyjnie jako otwartą ramkę odczytu z ATG pRSET. Ekspresję pRSET / shMultiTAG / E w E. coli (BL21-DE3) i oczyszczanie jej produktu, hmTAP, przeprowadzono jak opisano powyżej. Generowanie rhMBP i shPLP215. DNA kodujące izoformę 18,5-kDa ludzkiego MBP (17) poddano amplifikacji PCR z biblioteki cDNA ludzkiego mózgu (dar od Orly Reiner, Dept. of Molecular Genetics, The Weizmann Institute of Science), stosując 5. -CATGGTATGGCTAGCGCGTCACAGAAGAGA-3. (Podkreślona witryna NheI) i 5a-AACCAGAAGATCTTAGCGTCTAGCCATGGGTGATCC-3. (Podkreślono miejsce Bglll) odpowiednio jako starterów do przodu i do tyłu. Powstały fragment DNA strawiono i wklonowano do pRSET przez NheI i BamHI, 3 (3. do jego tagu 6xHis. Analiza sekwencji DNA za pomocą starterów pRSET potwierdziła sekwencję DNA rhMBP (18,5 kDa MBP) jako otwartą ramkę odczytu z ATG pRSET. Ekspresję pRSET / rhMBP do E. coli (BL21-DE3) i oczyszczanie rhMBP przeprowadzono jak opisano powyżej. ShPLP215 odpowiada shPLP / E, do którego dodano aminokwasy 215. 235 ludzkiego PLP. Wytworzono go w następujący sposób: DNA pGEMT / shTAG / PLP denaturowano i hybrydyzowano z oligonukleotydem shPLP215 I (odwrotnym) 5a-GATGGACAGAAGGTTGGAGCCACAAACCTTGCCAGGTGCGGTG ATGCCCACAAACTTGTC-3. przez dziesięć cykli przedłużenia nakładania się PCR. Amplifikacja PCR była kontynuowana przez 35 cykli przy użyciu jako startera starterowego oligonukleotydu shPLP215 II, 5a-TTGGACGCTAGCCTGTTCTGTGGCTGTGGACAT-3y, a nie shPLP Ib, w celu wprowadzenia miejsca NheI (podkreślone). Produkt PCR o oczekiwanej wielkości został odprężony do oligonukleotydu shPLP215 III (odwrotna) 5a-GCAAGCTTCTACGCTCCGAACTCAGCTGTTTTGCAGATGGACA GAAGGTTGGAGCC-3. (Podkreślona strona HindIII). Po dziesięciu cyklach przedłużania nakładania się PCR dodano shPLP215 II i kontynuowano amplifikację PCR przez 35 cykli. Produkt PCR klonowano do pRSET przez NheI i HindIII, 3. do jego tagu 6xHis. Analiza sekwencji DNA za pomocą starterów pRSET potwierdziła sekwencję DNA shPLP215 jako otwartą ramkę odczytu z ATG pRSET. Ekspresję pRSET / shPLP215 do E. coli (BL21-DE3) i oczyszczanie shPLP215 przeprowadzono w sposób opisany powyżej. Linie komórkowe T i odpowiedzi proliferacyjne limfocytów T. Linia komórkowa T specyficzna dla pMOG35-55a wytworzona z myszy immunizowanych pMOG35-55 (3H.SW była taka, jak opisano (18). Linię komórek T swoistych wobec PLP139-151 p uzyskano w ten sam sposób, przez selekcję in vitro z komórek węzłów chłonnych (LNC) myszy SJL / J zagruntowanych 9 dni wcześniej 100 .g PLP139-151 w CFA zawierającej 250 .g Mycobacterium gruźlica (Mt) H37Ra (3114-25, Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA)
[patrz też: zespół mielodysplastyczny, zapalenie ucha u dziecka objawy, ziarnica zlosliwa ]

0 thoughts on “szczawnica sanatoria opinie”