Skip to content

świeradów zdrój sanatorium goplana opinie

2 miesiące ago

569 words

Skuteczność transfekcji kontrolowano przez kotransfekcję 0,2. G konstruktu ekspresyjnego P-galaktozydazy. Komórki zebrano 24 godziny po transfekcji i testy lucyferazy przeprowadzono jak opisano wcześniej (19). Generowanie myszy MTI / G-Gly APCmin . / +. Myszy MTI / G-Gly, które nadeksprymowały gastrynę o przedłużonej glicynie, wytworzono jak opisano wcześniej na tle myszy FVB (16). Myszy MTV / G-Gly i kontrolne myszy FVB krzyżowano z myszami APC / A5 + C57BL / 6 i otrzymane szczenięta badano przesiewowo na transgen MTI / G-Gly i mutację min (21), jak opisano wcześniej. W tym badaniu zastosowano 20 myszy MTI / G-Gly APCmin . / + i 20 myszy kontrolnych APCmin. / +. Wytwarzanie myszy APCmin . / + z niedoborem gastryny. Myszy z niedoborem gastryny wytworzono na podłożu C57BL / 6x SV129, jak opisano poprzednio (17). Połączono je z myszami AP57BL / 6 APCmin . / + (The Jackson Labs, Bar Harbor, Maine, USA) i otrzymane szczenięta badano przesiewowo pod kątem heterozygotyczności pod względem minowej mutacji (21) i pod względem genu pozbawionego gastryny (17) jako opisane wcześniej. Powstałe heterozygoty zostały następnie połączone z myszami z niedoborem gastryny, a te, które wykazywały niedobór gastryny i heterozygotyczne pod względem min. Mutacji, zastosowano do analizy. Jako kontrole, myszy pierwszej generacji, które były heterozygotyczne pod względem zarówno mutacji min, jak i genu zerowego gastryny, łączono w pary z myszami C57BL / 6x SV129 typu dzikiego i tymi, które były heterozygotami pod względem mutacji min i homozygotami pod kątem dzikich zwierząt. rodzaj allelu gastryny stosowano jako kontrole. Piętnaście myszy APCmin . / + z niedoborem gastryny i 15 myszy kontrolnych APCmin (3 + + zastosowano do analizy polipów i do analizy przeżycia użyto piętnastu dodatkowych myszy z każdej grupy. Określenie liczby polipów. Piętnaście myszy APCmin . / + z deficytem gastryny, 15 myszy kontrolnych C57BL / 6 APCmin (/ +, myszy 20 MTI / G-Gly APCmin (3 + i 20 myszy kontrolnych FVB APCmin (3 / + uśmiercono po 6 miesiącach. Myszy zważono, uzyskano surowicę i wyizolowano małe i duże jelito. Następnie umieszczono je na szalce Petriego zawierającej PBS i badano za pomocą mikroskopu stomatologicznego Zeiss Stemi 1000 (Carl Zeiss Inc., Jena, Niemcy) w celu określenia liczby i wielkości polipów. Uwzględniono tylko polipy o wielkości mm lub większej. Trzy duże polipy (> 3 mm) uzyskano od każdej myszy do analizy DNA. Następnie tkankę jelitową umieszczono w utrwalaczu Carnoya na noc i zatopiono w wosku parafinowym do analizy histologicznej. Włączenie 5-bromo-2 -deoksyurydyny. Na godzinę przed uśmierceniem 15 myszom z niedoborem gastryny i kontrolnym myszom APCmin (3 + wstrzyknięto dootrzewnowo 5-bromo-2-deoksyurydynę (BrdU; 50 mg / kg). Jelita wycięto i utrwalono w utrwalaczu Carnoya na noc. Barwienie immunohistochemiczne przeprowadzono za pomocą przeciwciała BrdU (DAKO, Glostrup, Dania), jak opisano wcześniej (16). Dla każdej myszy analizowano do trzech polipów 1. 2 mm, 2. 3 mm i większych niż 3 mm. Wskaźnik znakowania zdefiniowano jako liczbę pozytywnie zabarwionych komórek podzieloną przez całkowitą liczbę komórek w każdym polipu. Wykrywanie mutacji k-ras. Polipy większe niż 3 mm były mikroskopijnie oddalone od normalnego nabłonka okrężnicy przy użyciu mikroskopu stomatologicznego Zeiss Stemi 1000 (Carl Zeiss Inc.) i trawione w roztworze zawierającym 50 mM Tris, pH 8,0, 0,5% Triton X-100 i proteinaza K ( mg / ml) przez noc w temperaturze 55 ° C, a następnie gotowano przez 10 minut w celu inaktywacji proteinaz K. Następnie przeprowadzono analizę PCR, jak opisano wcześniej (22). Analiza statystyczna. Wyniki wyrażono jako średnie plus lub minus SEM. Zastosowano test ANOVA dla różnic losowych, test Studenta i testy log-rank
[więcej w: zakrzepica nóg, hiperamonemia, zapalenie przyzębia ]

0 thoughts on “świeradów zdrój sanatorium goplana opinie”