Skip to content

rehabilitacja zwyrodnienia stawu kolanowego

2 miesiące ago

578 words

IOP mierzono tonometrem (TonoLab; Colonial Medical Supply). Dzienne IOP mierzono między 9 a 11 rano. Te same myszy stosowano do pomiaru nocnego IOP, a IOP mierzono w ciemności między godziną 23 a rano. Liczenie RGC. P-Synukleina preferencyjnie wybarwia RGC, a całkowitą liczbę przeżywających RGC określono za pomocą obrazowania konfokalnego, jak opisano wcześniej (40, 41). Preparaty na całej górze siatkówek inkubowano przez 0,3% Triton X-100 przez noc i blokowano 5% surowicą kozią przez godzinę. Te siatkówki inkubowano następnie z przeciwciałem a-synukleiny przez 3 godziny, a następnie standardową inkubację przeciwciał wtórnych (kozie anty-królicze 568, 1: 200, Invitrogen). W celu zliczania 5 nienakładających się obrazów obszaru środkowo-brzegowego uchwycono z każdego kwadrantu w powiększeniu x 200 przy użyciu konfokalnego mikroskopu skaningowego LaserSharp2000 (Bio-Rad). Komórki a-synukleiny. Zliczono w obszarze 300. M2 każdego obrazu przy użyciu oprogramowania ImageJ (NIH). PERG. PERG został użyty do obiektywnego pomiaru funkcji RGC poprzez rejestrację amplitud i opóźnień przebiegów N35-P50 i P50-N95 PERG. Myszy znieczulono mieszaniną 75% O2 i 25% NO i 3,5% halotanu. Następnie myszy umieszczono na stole rejestrującym ze stali nierdzewnej wyposażonym w platformę do podgrzewania na bazie gorącej wody, aby utrzymać temperaturę ciała, a stężenie halotanu zmniejszono do 1,75%. Myszy ustawiono 20 cm od monitora bodźca z kątem nachylenia głowy pod kątem 45 stopni, aby zapewnić bezpośrednią ekspozycję bodźca kraty na oś wizualną zarejestrowanego oka. Wzorcowe odpowiedzi ERG wywoływano stosując naprzemienne, rewersyjne, czarno-białe pionowe bodźce dostarczane na monitorze CRT z systemem Roland Consult ERG (Roland Consult). Każde zwierzę umieszczano w tej samej stałej pozycji przed monitorem, aby zapobiec zmienności rejestracji w związku z umieszczaniem zwierząt. Bodźce (9 ° pełny wzór pola, Hz częstotliwości, 200 uśrednionych sygnałów z odcięciem częstotliwości filtrów 1. 30 Hz) zostały dostarczone w warunkach fotopowych, ponieważ powolna prędkość stymulacji w warunkach mesopic i skotopowych może wywołać pełne pole w pośredniczeniu prętem Odpowiedzi ERG, które mogą całkowicie ukryć odpowiedzi PERG u gryzoni. Wizualnie wywołane odpowiedzi oceniano przez pomiar amplitud (N35-P50 i P50-N95) i odpowiadających im niejawnych czasów (latencji). Niejawne czasy obliczono dla markerów N35, P50 i N95 oprócz domniemanych czasów dla składników N35-P50 i P50-N95. Ocena uszkodzenia nerwu wzrokowego. Neurodegeneracja nerwu wzrokowego została zbadana przy użyciu barwnika parapenylenodiaminowego (PPD). PPD plami osłonkę mielinową wszystkich aksonów i różnicuje aksoplazmę uszkodzonych aksonów (42). Nerwy wzrokowe pocięto i utrwalono przez noc w buforze fosforanowym 3% aldehydem glutarowym / paraformaldehydem w 4 ° C, a następnie przez nocną obróbkę w 1% tetratlenku osmu w 4 ° C. Nerwy następnie przepłukano dwukrotnie przez 10 minut w 0,1 M buforze fosforanowym i raz w 0,1 M buforze octanowo-sodowym, a następnie odwodniono w stopniowanych stężeniach etanolu. Po osadzeniu w żywicy (Eponate-12, Ted Pella), wycinki 1- (3 m cięto i barwiono w 1% PPD przez 10 minut. Aksony nerwu wzrokowego zostały ocenione i zliczone za pomocą poprzednio opisanej metody (42). W skrócie, 18 nienakładających się obrazów pokrywających cały nerw wzrokowy wykonano przy powiększeniu x 1000, a aksony policzono w obszarze równym 10% całkowitego przekroju nerwu. Immunobarwione. Mysie tkanki odcinka przedniego lub komórki TM utrwalono w 4% formaldehydzie i zatopiono w sacharozie. Skrawki następnie blokowano 5% normalną surowicą. Preparaty inkubowano przez noc z pierwotnym przeciwciałem w 1,5% (v / v) prawidłowej surowicy, następnie przemyto 3 razy PBS, a następnie inkubowano przez 2 godziny w odpowiednich drugorzędowych przeciwciałach Alexa Fluor (1: 200, Invitrogen).
[więcej w: zespół lyncha, zapalenie nerwu twarzowego, ziarnica zlosliwa ]

0 thoughts on “rehabilitacja zwyrodnienia stawu kolanowego”