Skip to content

przetłuszczające się włosy tabletki

3 miesiące ago

623 words

Wszystkie związki zostały wstępnie przefiltrowane pod kątem podobieństwa leku. uruchamiając własne oprogramowanie ADME-Tox, aby przewidzieć log P, log D, rozpuszczalność w wodzie i kryteria Lipinskiego. Moduł Selector oprogramowania Sybyl (Tripos) do modelowania molekularnego został wykorzystany do analizy różnorodności strukturalnej. Wskaźnik różnorodności wynosił 0,01 dla zestawu 500 związków. Związki zostały posortowane i wybrane przy użyciu strukturalnych odcisków palców Unity 2D wbudowanych w oprogramowanie. Związki drugiej generacji. Biblioteka drugiej generacji została zsyntetyzowana przy użyciu rozbieżnego, półautomatycznego schematu. W pierwszej fazie 4 aromatyczne aldehydy i fenyloacetaldehyd kondensowano z 4 hydrofobowymi pierwszorzędowymi aminami w warunkach redukujących aminowanie Borcza. W drugiej fazie syntezy równoległe acetylowanie tych 20 drugorzędowych amin z 5 podstawionymi chlorkami benzoilu dostarczyło końcową bibliotekę 100-związku. Schematyczną ilustrację strategii stosowanej do syntezy związków drugiej generacji przedstawiono na Uzupełniającej Figurze 2. Wszystkie końcowe produkty oczyszczono metodą preparatywnej HPLC z odwróconymi fazami (C18). Czystość związku (> 95%) oceniano za pomocą analitycznej HPLC z odwróconymi fazami i weryfikowano tożsamość za pomocą spektrometrii mas. Radioznakowanie ligandów RAGE. Ludzkie A40 i Ap42 zsyntetyzowano w Laboratorium Zasobów Fundacji Biotechnologii WM Keck (Yale University, New Haven, Connecticut, USA) stosując chemię w fazie stałej Nt-butyloksykarbonyl i oczyszczono za pomocą HPLC, jak podano (9, 10). Na125I otrzymano z NEN Radiochemicals. Radioaktywację A40 i AUC42 (10 .g) prowadzono metodą łagodnego laktoperoksydazy, stosując 2 mCi Na125I (9). Monodiodyzowane nieutlenione formy A. oczyszczono za pomocą HPLC w układzie faz odwróconych i ich tożsamość potwierdzono za pomocą spektrometrii masowej MALDI-TOF, jak podano (9, 60). Specyficzna aktywność 125I-A. peptyd był peptydem od 45 do 65 (Ci / g. Rekombinowane ludzkie amfote- tyny (HMGB1; R & D Systems) i rekombinowane ludzkie S100B (OriGene Technologies) (10 .g) znakowano radioizotopowo stosując 0,5 mCi Na125I przez Iodo-Gen (Thermo Scientific). Wolny jodek usunięto przez filtrację żelową. Ligandy wyznakowane 125I wykazują specyficzną aktywność w przybliżeniu 20 CiC / g. We wszystkich badaniach radioznakowane ligandy były stosowane w ciągu 24 godzin od znakowania. ZA. wiązanie z komórkami RAGE-CHO. Wiązanie 125I-Ap40 (5 nM) z RAGE na powierzchni komórki w komórkach CHO transfekowanych RAGE przeprowadzono w 4 ° C w obecności różnych stężeń nieznakowanego Ap40 (10. 200 nM), jak podano (32). . To badanie zostało przeprowadzone w celu potwierdzenia testu, którego używaliśmy później w ekranach pierwotnych i wtórnych. Potwierdziliśmy nasycalny charakter wiązania A (3 / RAGE w komórkach RAGE-CHO ze stałą wiązania (Kd) wynoszącą 75. 5 nM i maksymalna zdolność wiązania (Bmax) 0,25. 0,03 nmola / h / 104 komórek (Suplementowa Figura 1B), która jest podobna do tej zgłoszonej (32). Wartości Kd i Bmax określono przy użyciu nieliniowego pakietu oprogramowania do analizy regresji (GraphPad Prism, wersja 3.02, oprogramowanie GraphPad). Strategia przesiewowa. Test wiązania 125I-Ay40A w komórkach RAGE-CHO przeprowadzono jak opisano (32) i opisano powyżej. Najpierw inkubowano komórki RAGE-CHO w temperaturze 4 ° C przez 3 godziny z 125I-Ap40 (5 nM) w nieobecności lub obecności 5000 związków biblioteki małocząsteczkowej stosowanych w stężeniu 10. M. Pod koniec okresu inkubacji komórki przemyto zimnym, nieradioaktywnym podłożem, aby usunąć 125I-Ay40. Komórki następnie lizowano w roztworze zawierającym 1% NP-40 w 0,1 M NaCl w 37 ° C przez 15 minut. Radioaktywność określono przy użyciu 1470 licznika Gamma Gamma Wallac (PerkinElmer). Frakcję 125I-A340 związaną z RAGE na powierzchni komórkowej oznaczono jak podano wcześniej (32). Pierwotny ekran ujawnił 7 związków na 5000, które zahamowały wiązanie A (3 / RAGE. Aby określić względne powinowactwo hamujące 7 związków z pierwotnego badania przesiewowego, badaliśmy ich zdolność do blokowania wiązania Ap / RAGE przy znacznie niższym stężeniu 50 nM, które jest bliskie wartości Kd dla A. wiązanie z RAGE w komórkach RAGE-CHO (tj. 75 nM, patrz powyżej, wiązanie A (3 z komórkami RAGE-CHO)
[przypisy: zakrzepica nóg, zapalenie okostnej objawy, zapalenie przyzębia ]

0 thoughts on “przetłuszczające się włosy tabletki”

  1. [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: stomatolog bielsko biała[…]