Skip to content

jak ułożyć diete na redukcje tłuszczu

2 miesiące ago

540 words

Rola czynnika wzrostu specyficznego dla okrężnicy została potwierdzona u myszy z niedoborem gastryny, które wykazują zmniejszenie proliferacji okrężnicy, które można skorygować poprzez wlew gastryny o przedłużonym glicynie (17). Nasza analiza sekwencji ludzkiej promotora gastryny 1,3 kb ujawniła kilka potencjalnych miejsc wiążących konsensus TCF-4 (Figura 1a). W związku z tym wysunięto hipotezę, że gastryna może również być biologicznie aktywnym celem skierowanym w dół szlaku sygnalizacji a-katenina / TCF-4. Figura 1Gastryna jest dalszym celem szlaku APC / P-katenina. (a) Schematyczne przedstawienie konstruktu ludzkiego promotora gastryny (19) o długości 1300 pz, zawierającego kilka potencjalnych miejsc wiązania TCF-4 (3. Miejsca wiązania TCF-4 . o wysokiej homologii ze znanymi konsensusowymi motywami czynnika transkrypcji czynnika TCF / Lef-HMG [CC (A / T) TTG (A / T) (A / T) (T / C); ref. 25, 27] zostały zidentyfikowane w promotorze gastryny za pomocą oprogramowania do analizy DNA Lasergene99. Homologiczne zasady są drukowane wielkimi literami: 1166 tCTTTGgca-1156, 1000 GATGAAACC-990, 822 aCTTTGTcT-812, 5 516 CCATTGCTC5 506, 10 103 CCATTccTC-93. (b) Analiza Northern błot RNA pobranych z komórek HT-29-APC i HT-29-GAL, które indukowano cynkiem w celu ekspresji APC typu dzikiego lub p-galaktozydazy typu dzikiego. Blot sondowano albo za pomocą ribosonda do eksonu 2 ludzkiej gastryny albo GAPDH. (c) Komórki HeLa transfekowano serią konstruktów delecyjnych reporterowych promotorowej gastryny-lucyferazy (liczba odzwierciedla długość promotora z początkowego miejsca transkrypcji), a następnie kotransfekowano konstytutywnie aktywnym konstruktem ekspresyjnym. -keneniny samodzielnie (wypełnione słupki) lub obydwoma konstytutywnie aktywny konstrukt ekspresyjny (3-katenina z dominującym negatywnym konstruktem TCF-4 (pręty otwarte). Podstawowy konstrukt promotora Pxp2 zastosowano jako kontrolę. Wyniki pochodzą z trzech niezależnych eksperymentów. (d) Pokazano sekwencje zawierające miejsce wiążące typu TCF-4y typu dzikiego od A 103 do . 90 na promotorze gastryny, zmutowane miejsce wiążące TCF-4 (3 lub odpowiadającą doskonałą sekwencję konsensusową TCF-4 (Con). . Sekwencje te zastosowano do wytworzenia heterologicznych konstruktów promotorowych przez klonowanie ich powyżej promotora kinazy tymidynowej w konstrukcie reportera lucyferazy pT81. (e) Komórki HeLa następnie transfekowano konstruktem TCF-4-pT81 typu dzikiego, zmutowanym konstruktem TCF-4-pT81, konsensusowym konstruktem TCF-4-pT81 lub pustym konstruktem pT81 i konstytutywnie aktywną k-keneniną. konstrukt ekspresyjny (wypełnione słupki) lub zarówno konstytutywnie aktywny konstrukt ekspresyjny (3-katenina, jak i dominujący negatywny konstrukt TCF-4 (pręty otwarte). Metody Badania Northern blot. W tym eksperymencie wykorzystano linie komórkowe HT-29-APC i HT-29-GAL (miły prezent Kennetha Kinzlera, Johns Hopkins Oncology Center, Baltimore, Maryland, USA). Hodowlę komórek i indukcję cynku (120 .M ZnCl2) przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (18). Całkowity RNA wyizolowano za pomocą TRIZOL (Life Technologies Inc., Gaithersburg, Maryland, USA). Dwadzieścia mikrogramów RNA załadowano na ścieżkę. Blot sondowano ludzkim eksonem 2 rybosilnikiem z eksonu 2 (16) i po usunięciu plam za pomocą sondy do GAPDH. Northern bloty zostały następnie zeskanowane przez skaner Arcus II (AGFA, Lerverkusen, Niemcy), a densytometrię przeprowadzono przy użyciu programu NIH Image 1.62 (NIH, Bethesda, Maryland, USA) na blotach reprezentujących cztery niezależne eksperymenty. Badania transfekcji komórkowej. Wykładniczo rosnące komórki HeLa hodowano w DMEM z 10% FBS i transfekowano je Lipofectamine (Life Technologies Inc.) stosując 0,4 jug konstruktu reportera-promotora lucyferazy gastryny (miły dar Daniela Chunga, Massachusetts General Hospital, patrz odnośnik 19) i 0,4 g konstytutywnie aktywnej a-kateniny (upominek od Eric a Fearon, University of Michigan Medical Center, Ann Arbor, Michigan, USA;
[podobne: zakrzepica leczenie, zatorowość płucna objawy, zespół aspergera test ]

0 thoughts on “jak ułożyć diete na redukcje tłuszczu”