Skip to content

działanie cytryny na włosy

2 miesiące ago

669 words

Skrawki następnie inkubowano z DAPI przez 30 minut w celu wybarwienia jąder, przemyto, a następnie zamontowano. Obrazy zostały przechwycone przy użyciu systemu obrazowania konfokalnego Zeiss 710 w ośrodku badawczym mikroskopii centralnej Uniwersytetu Iowa. Przeciwciało myocylinowe stosowane do immunobarwienia otrzymano od Stanislava Tomareva (NIH, Bethesda, Maryland, USA). Analiza Western blot. Segmenty przedniego odcinka lub tkanki kąta podniebiennego ostrożnie wycięto i poddano lizie w buforze do lizy. Komórkowe białka rozdzielono na denaturujących żelach poliakrylamidowych, a następnie przeniesiono na membrany PVDF przez elektroforezę. Bloty blokowano 5% odtłuszczonym mlekiem przez godzinę. Następnie bloty inkubowano przez noc z określonymi przeciwciałami pierwszorzędowymi. Błony przemyto buforem buforowanym roztworem Tris / Tween (TBST) Tris i inkubowano z odpowiednim wtórnym przeciwciałem skoniugowanym z peroksydazą chrzanu. Białka wizualizowano następnie w twórcy rentgenowskim, stosując odczynniki do wykrywania ECL (SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate; Pierce Biotechnology). Aby zapewnić równe ładowanie białka, ten sam blot inkubowano następnie z przeciwciałem monoklonalnym GAPDH (Cell Signaling Technology Inc.). Ocenę ilościową przeprowadzono za pomocą oprogramowania ImageJ (NIH). Aby zbadać wydzielanie MYOC, 50 ul kondycjonowanej pożywki poddano analizie Western blot. Aby zbadać miocylinę w cieczy wodnistej, wyizolowano około 2 fil cieczy wodnistej z każdej nietraktowanej Tg-MYOCY437H (n = 6), traktowanej PBA Tg-MYOCY437H (n = 6) i myszy WT (n = 5). Przeciwciała dla GRP78, GRP94, pelF-2a, elF-2a, Irel i CHOP zakupiono z Cell Signaling Technology Inc. Przeciwciała dla a-synukleiny, kaspazy 12 i XBP-1 pochodziły z Abcam Inc., a przeciwciała dla ATF-6 zakupiono od Imgenex Corp. Przeciwciało MYOC (sc-137233) zakupiono od Santa Cruz Biotechnology Inc. W celu analizy wewnątrzkomórkowych agregatów MYOC komórki lizowano w buforze zawierającym 0,5% Triton X-100, a rozpuszczalne frakcje analizowano przez Western blotting. Hodowla ludzkich komórek TM i ludzkich fibroblastów. Ludzkie komórki TM otrzymano z Alcon Research Ltd. i hodowano jak opisano wcześniej (43). Hodowle komórkowe utrzymywano w DMEM uzupełnionym 10% FBS (Hyclone Laboratories), 2 mM l-glutaminą, penicyliną (10 000 jednostek / ml) i streptomycyną (10 ug / ml) (Gibco BRL, Invitrogen). Biopsję skóry uzyskano od pacjenta z mutacją Y437H z mutacją MYOC z pacjentem z JPOK i dobranym pod względem wieku ludzkim dawcą. Ludzkie fibroblasty hodowano w DMEM uzupełnionym 10% FBS. Wektory adenowirusowe otrzymano z wektora Gene Transfer Vector Core, University of Iowa (9, 17). W przypadku transfekcji adenowirusowej równą liczbę komórek TM hodowano w 12-studzienkowych płytkach przez 8-10 dni. Komórki infekowano adenowirusem przy 20 PFU / komórkę przez godzinę w DMEM bez surowicy. 4-PBA (5 mM) dodano do komórek zakażonych adenowirusem eksprymującym WT MYOC lub Y437H MYOC, a komórki TM hodowano przez 5 dni. Pożywkę hodowlaną zawierającą 4-PBA zmieniano codziennie. Lizaty komórkowe i pożywkę zebrano i poddano dalszej analizie. Wstrzyknięcia przedniej komory. W przypadku iniekcji w przedniej komorze zwierzęta znieczulono koktajlem znieczulenia mysim (ketamina [73 mg / kg] i ksylazyna [1,8 mg / kg]). Wektory z wektora adenowirusowego (3 x 109 PFU / oko) lub tunikamycyny (0,03, 0,3 i 3 .g / oko) wstrzyknięto do przedniej komory w objętości 2 .l do obu oczu każdego zwierzęcia. Myszy, u których rozwinęły się nieprawidłowości oka, zostały wykluczone z dalszych badań. Zastrzyki DMSO zastosowano jako kontrolę nośnika dla tunikamycyny. Leczenie PBA. 2-miesięczne WT (n = 8) i Tg-MYOCY437H (n = 13) mioty z miotu podzielono na 2 grupy; grupę traktowano 20 mM PBA w wodzie pitnej, podczas gdy druga grupa otrzymywała wodę bez leku Sól sodową 4-PBA o czystości farmaceutycznej zakupiono w Skandynawskich recepturach. Sól sodowa 4-PBA jest rozpuszczalna w wodzie i dlatego jest dodawana świeżo do wody pitnej co tydzień przez 5 tygodni. Wykonano pomiary poboru wody, a myszy traktowane i nietraktowane spożywały równe ilości wody. Myszy codziennie wypijały średnio 3,2 ml wody zawierającej lek. Dlatego każda mysz otrzymała średnią 10 mg / mysz / dzień. Ponieważ myszy Tg-MYOCY437H rozwijały podwyższone IOP pomiędzy 2 a 3 miesiącem życia, rozpoczęliśmy leczenie PBA po 2 miesiącach i zbadano IOP po 5 tygodniach leczenia. W leczeniu starszych myszy Tg-MYOCY437H dawkowanie PBA było d
[przypisy: zapalenie ucha u dziecka objawy, ziarnica zlosliwa, zespol retta ]

0 thoughts on “działanie cytryny na włosy”