Skip to content

dr tyczyński zabrze

3 tygodnie ago

551 words

Limfocyty T specyficzne dla hmTAP wyselekcjonowano in vitro z LNC myszy (C3H.SW x SJL / J) F1 starterowanych 9 dni wcześniej 200 .g hmTAP w CFA zawierającej 150 .g Mt. Wszystkie linie komórek T utrzymywano in vitro w pożywce zawierającej IL-2 ze stymulacją odpowiednim antygenem (10 .g / ml) w obecności napromieniowanych (25 Gy) syngenicznych komórek śledziony (APC) co 10-14 dni zgodnie z opisem ( 19). Specyficzne dla antygenu odpowiedzi proliferacyjne linii komórek T (1,5 x 104 / studzienkę) hodowano w studzienkach do mikromiareczkowania w obecności napromieniowanych syngenicznych komórek śledziony, gdy APC (5 x 105 / studzienkę) testowano jak opisano wcześniej (19). Indukcja EAE. Myszy wstrzyknięto podskórnie w bok z antygenem emulgowanym w CFA wzbogaconym w Mt (patrz szczegóły na figurach) dla aktywnego EAE. Transfer adoptywny Eksperymenty EAE przeprowadzono w sposób opisany wcześniej (18, 19). Pokrótce, liniowe limfocyty T stymulowane in vitro odpowiednim antygenem wstrzyknięto w 0,5 ml PBS 4 dni później w żyłę ogonową naiwnych syngenicznych biorców. Myszy śledzono i oceniano codziennie w skali 0. 6, jak opisano poprzednio (20). Testy cytokinowe. Cytokiny wykrywano metodą ELISA zgodnie ze standardowymi protokołami PharMingen (San Diego, Kalifornia, USA). Przechwycone Ab oznacza szczurzą przeciwmysią IL-4 (18191D, PharMingen), szczurzą przeciwmysią IL-2 (18161D, PharMingen), szczurzą przeciwmysią IL-10 (AMC0102; BioSource International, Camarillo, Kalifornia, USA ) i szczurzy anty-mysie IFN-y (AMC4834, BioSource International). Biotynylowane Aby były szczurzym przeciw mysiemu IL-2 (18172D, PharMingen), szczurzy anty-mysia IL-4 (18042D, PharMingen), szczurzy anty-mysia IL-10 (18152D, PharMingen) i szczurze anty-mysz IFN-. (18112D, PharMingen). Wyniki Budowa shMultiTAG / E i wyrażenie hmTAP. ShMultiTAG / E zaprojektowano do kodowania białka pilotowego (hmTAP) do zastosowania w badaniu możliwości wywoływania autoimmunologicznych, zapalnych chorób OUN, w których pośredniczy autoantygenigen / multspepsyope skierowanej przeciwko komórkom T. Ponieważ działanie immunomodulujące hmTAP należy badać w EAE związanym z wieloma chorobotwórczymi autoreaktywnościami u myszy (C3H.SW x SJL / J) F1, epitopy zawarte dla każdego z potencjalnych docelowych antygenów mózgu, MBP, PLP lub MOG, były wybranych pod względem ich potencjału encefalitogennego u rodzicielskich szczepów myszy. Regiony, które miały zawierać główne epitopy immunodominujące rozpoznawane przez limfocyty T od pacjentów ze stwardnieniem rozsianym, były również uwzględnione w przewidywaniu przyszłych badań na specyficznych dla epitopu komórkach T od pacjentów z SM. Odpowiednio, klastry epitopowe wybrane do MOG obejmowały aminokwasy 32. 58, które obejmują region encefalitogenny dla myszy H-2b (18), i aminokwasy 1. 25 i 63. 97, które stanowią, oprócz aminokwasów 32. 58, regiony zawierające immunodominujące epitopy rozpoznawane przez komórki T MS (przegląd w odnośniku 1). Klastry epitopowe wybrane dla MBP, w aminokwasach 7a50, 83a 106 i 142a 168, obejmują trzy główne regiony immunodominujące najczęściej rozpoznawane przez komórki T od pacjentów z MS (przeglądowi w odnośniku 1), jak również główny encefalitogenny epitop MBP dla myszy SJL / J, MBP89-101 (omówiony w odnośniku 2), który jest także encefalitogenny dla myszy H-2b (21). Klastry epitopowe wybrane do PLP zawierają główny immunodominujący encefalitogenny epitop dla myszy SJL / J, PLP139-151 (przegląd w pozycji 2), jak również epitopy zgłoszone jako często rozpoznawane przez komórki T MS, w aminokwasach 40. 60, 94. 117 i 138. 155 (przegląd w pozycjach 22, 23). Minigeny ShTAG / MOG, shTAG / MBP i minigeny shTAG / PLP, każdy zaprojektowany do kodowania dla polipeptydu zawierającego aminokwasy objęte wybranymi tandemowo uporządkowanymi regionami odpowiednio MOG, MBP i PLP (Figura 1a), wytworzono jak opisano w Metody
[patrz też: hiperamonemia, zespół aspergera test, zespół tietza ]

0 thoughts on “dr tyczyński zabrze”